Bradford蛋白濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）
Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）
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產品編號
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產品名稱
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包裝
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RTP7104
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Bradford蛋白濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）
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800次
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● 試劑盒內容及保存：
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貨號
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產品名稱
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包裝
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貯存方式
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RTP7104-01
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考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）
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250 ml
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4℃
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BSA-01
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牛血清白蛋白(BSA)標準溶液（5
mg/ml）
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2×1 ml
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-20℃
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RT0280-02
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PBS溶液
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10 ml
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4℃
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說明書
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1份
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● 儲存條件和效期：
考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）4℃貯存；牛血清白蛋白標準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年。試劑盒常溫運輸。
● 產品簡介：
Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件下和蛋白質結合，使得染料最大吸收峰從465nm變為595nm，在一定的線性范圍內，反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。該試劑盒進行了優化，能兼容一系列常見去垢劑和一定濃度的還原劑，并且檢測數據有很好的線性關系。本試劑盒的性能不僅優于常規的Bradford法，和BCA法相比也更加快速便捷。
蛋白研究中許多蛋白樣品都是含有去垢劑，因此常規Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢劑但檢測比較耗時的BCA法。但BCA法無法兼容還原劑。當蛋白樣品中同時含有一定濃度的去垢劑和還原劑時，常規的Bradford法和BCA法都無法使用，而本試劑盒仍然是可以檢測的。試劑盒兼容蛋白提取的多種裂解液，包括 Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。
按照每個10
μl樣品使用300 μl染色染色液計算，試劑盒可以至少檢測800個樣品。
● 產品特點：
1.
檢測速度快，10-20個樣品只需不足10分鐘即可完成。
2. 靈敏度高，檢測濃度下限可達25
μg/ml （測定濃度范圍在50-1000 μg/ml內有較好的線性關系），最小檢測蛋白量可達0.5
μg。
3. 該試劑盒測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1
M，DTT的濃度可高達5
mM。同時，此方法測定蛋白濃度可以兼容受高濃度的去垢劑影響，可以適用于膜蛋白樣品的濃度測定。蛋白樣品中SDS濃度低于1%，Triton
X-100濃度低于1%，Tween
20, 60, 80濃度低于1%，NP-40濃度低于1%都可以定量。
● 操作方法：
用前注意事項：
蛋白標準請全部溶解混勻后再使用。
需可檢測560-610 nm之間波長的酶標儀一臺，最佳檢測波長為595
nm。并需96孔微孔板。
微孔板測定程序：（最佳工作范圍50-1000 μg/ml）
1． G-250染液在使用前應平衡溫度至常溫并溫和顛倒混勻。
2． 1
mg/ml蛋白標準品配制：常溫完全溶解蛋白標準品，取20
μl 5 mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入80 μl PBS溶液，使其終濃度為1 mg/ml。
3． 按照下表配制BSA標準測定溶液：
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編號
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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8
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1 mg/ml BSA 標準溶液 μl
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BSA標準溶液 μl
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0
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0.5
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1.5
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2.5
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5.0
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7.5
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10
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15
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20
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PBS 溶液 μl
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20
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19.5
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18.5
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17.5
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15
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12.5
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10
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5
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0
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BSA終濃度 μg/ml
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0
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25
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75
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125
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250
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350
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500
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750
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1000
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總體積 μl
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20 μl
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4． 取10 μl不同濃度蛋白標準加到96孔微孔板的蛋白標準孔中。
5． 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，如果樣品不足10
μl，用PBS補足到10
μl；
6． 向微孔板中加入300 μl G-250染色液，混勻，常溫放置 3-5 min。
7． 用酶標儀測定A595波長的吸光度，以不含BSA
的樣品的光吸收值作為空白對照。可以立即測定吸光度，也可以在30分鐘內測定，30分鐘內檢測數據無顯著變化。對于不含去垢劑和含有某些去垢劑的情況，在2小時內檢測數據無顯著變化；對于含有某些特定去垢劑的情況，在2小時內檢測數據會有一定的變化，但仍然會呈現較好的線性關系。
8． 以A595為縱坐標，BSA含量為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內，請稀釋樣品后重新測定。
注：如使用分光光度計測定，可根據實際需要擴大溶液體積，保證蛋白標準溶液和蛋白樣品與
G-250染液的體積比為 10:300，例如，如果需要 1.5 ml，可取蛋白樣品 50 μl，G-250染液試劑 1.5 ml。
試劑盒對常見去垢劑的兼容性